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123儀器商城教你如何制備色譜

2010-12-23

123儀器商城教你如何制備色譜
制備型色譜是在分析型色譜的基礎(chǔ)上建立起來的，是一個從量變到質(zhì)變的過程。廣義講所有不同類型的色譜都能轉(zhuǎn)成制備型色譜，從制備規(guī)模和產(chǎn)值利潤考慮，制備型液相色譜當屬優(yōu)選的方法。
以中藥制藥為例。在確定了藥物的有效性后在分析型色譜的基礎(chǔ)上逐步發(fā)展成制備型色譜。
在研發(fā)階段先用小型的制備色譜制備mg級試樣供有效組分或有效部位的理化性質(zhì)的研究和化學結(jié)構(gòu)的分析。
從分析型到制備型液相色譜表現(xiàn)在樣品進樣量放大。與此相適應(yīng)：（1）泵流量、色譜柱長和柱內(nèi)徑相應(yīng)放大；（2）填料的填裝量放大到幾百克到幾十千克，甚至上百千克，填料粒度達40—80um；（3）流動相組成和檢測器參數(shù)也要做相應(yīng)的修改。
市場上出售的制備色譜柱尺寸規(guī)格還有更大的，填料硅膠C4、C8、C18、氰基、醇基等鍵合相。
雜質(zhì)常與被純化的組分混在一起，可用以下幾種流程分步地將雜質(zhì)和被純化的組分分開。
1、分段收集被子色譜柱分離了的組分按檢測器監(jiān)測的色譜峰收集。在檢測器的出口接一個組分收集切換閥，一個組分收集完畢后轉(zhuǎn)動切換閥到另一個收集品收集流出液，可以多次進樣，同一個組分收集在一起。選擇有效組分的收集液經(jīng)濃縮、洗滌、凈化即可得到粗產(chǎn)品，棄去雜質(zhì)和其它元用組分的收集液。能實施分段收集的首要條件是有效組分色譜峰無其它色譜峰的干擾。
2、重復制備多數(shù)情況下被純化的組分常與雜質(zhì)糾纏在一起，不適宜用分段收集法。重復制備是簡單的方法。第1次制備收集到的有效組分洗脫液經(jīng)濃縮后進行第2次制備，第1次制備可除去部分雜質(zhì)；第2次制備收集到的有效組分洗脫液經(jīng)濃縮后進行第3次制備，第2次制備已除去大部分雜質(zhì)；第3次制備……
第一次制備收集到大量的洗脫液，必須濃縮后才能進行下一次的制備，溶劑的消耗大，產(chǎn)率不高。
3、循環(huán)制備再循環(huán)系統(tǒng)由一個制備量泵、一個進樣器、一個六通閥、兩根制備色譜柱、兩個檢測器組成。連接方法：樣品進入系統(tǒng)后，先經(jīng)柱1和檢測池1（六通閥實線相通），繼而進入柱2，等所有的組分完全通過檢測池2后，轉(zhuǎn)動六通閥（六通閥虛線相通），使柱2的洗脫液再導入柱1，這相當于第三次循環(huán)，直到分離效果滿意為止再收集。
這種循環(huán)完全在密封系統(tǒng)中進行，不涉及到柱外擴散的死體積，分離效果尚好。但每次循環(huán)通過柱1和柱2的流動相方向都相同，色譜峰會自動擴散變寬。
4、反沖制備前面已介紹過反沖技術(shù)，此處介紹如何應(yīng)用反沖技術(shù)制備純化有效組分。在制備的樣品中含有保留很強的雜質(zhì)或組分，可選用反沖制備方法。不需要反復循環(huán)，流程一次循環(huán)可制備完畢。
這種制備方式只要1臺泵，1個進樣器，1個檢測器，兩根色譜柱。增加1個六通的切換閥，1個五通的反沖閥（可用六通閥代替）。進樣后樣品隨著流動相沿實線（→）由柱1經(jīng)反沖閥到柱2，經(jīng)切換閥再回到反沖閥，從檢測器的監(jiān)測中棄去雜質(zhì)、收集有效組分后立即同時轉(zhuǎn)動反沖閥和切換閥。此時流動相沒圖中的虛線（→）首先進入反沖閥，再反相流經(jīng)柱1經(jīng)切換閥后反相流經(jīng)柱2，后從檢測器流出，后去掉保留很強的雜質(zhì)，或者洗脫保留很強的組分。
通過反沖流動相先后兩次以不同的方向進入1和2柱。反沖前可去掉干擾有效組分的雜質(zhì)，并收集有效組分，反沖后那些保留很強的雜質(zhì)或組分以相同的速度從原路返回，后流出檢測器。整個流程節(jié)約了大量因洗脫強保留雜質(zhì)和組分消耗掉的流動相。